甘油保藏菌种实验过程

　　一、甘油保藏菌种实验过程

　　1、准备工作

　　准备好镊子、EP管、枪头等工具，再将它们放入高压灭菌锅中做杀菌处理。

　　2、消毒处理

　　在手上擦拭酒精，并对镊子消毒，然后用镊子取出10支EP管并放入试剂盒中。

　　3、放入菌种

　　用移液枪取出50%的甘油，然后放入EP管中，再取出菌种放入EP管。

　　4、低温保存

　　盖上盖子，做好标注，再将所有菌种都装入袋中（袋子也要做好标注），最后把袋子放入冰箱内保存，温度控制在零下20℃。

　　二、甘油保藏菌种原理

　　1、保藏原理

　　甘油可以作为菌种的保护剂，在低温冷冻的条件下，微生物的新陈代谢趋于停止，此时即可达到长期、有效地保藏菌种（温度越低，保藏效果越好）。

　　2、注意事项

　　（1）应使用非选择性的增菌培养基，因为微生物在选择性培养基中生长时可能会丢失某些生物特性，而且保藏的菌种的生物特性可能和标准菌株的特性有所差异。

　　（2）菌液的浓度越大，菌种的保存时间越长。保藏细菌常使用菌液，保藏霉菌常使用无菌水或用生理盐水制备成的孢子悬液。

　　（3）甘油的最终浓度为10-20%。甘油原液过于粘稠，需配制适宜的甘油水溶液，将菌悬液和甘油按照1：1的体积比例充分混匀，再分装至经过灭菌处理的保藏管中，最后放入零下70-80℃的冰箱中保存。

　　（4）甘油适合中长期菌种保藏，保藏时间为2-4年左右。